Царем Алексеем Михайловичем вместе с похвальной грамотой за храбрость пожаловано Донским казакам второе Царское знамя. В грамоте было написано: "За мужество и храбрость бившихся честно, жалуем и милостиво похваляем и посылаем вам, нашему Донскому войску, атаманам и казакам, Нашего Царского Величества знамя, да впредь на нашу царскую милость будьте надежны. Тех же вольных людей и шацких стрельцов, всего 600 человек, которые на отходе разбрелись, и струги у вас вверх по Дону порастаскали и порубили, велели мы бить кнутом, чтобы такое воровство другим было не в повадку. Крымцев и ногаев воевать, а с турецкими людьми под Азовом жить мирно повелеваем!"
Знамя 1645 года было малинового цвета с зеленой каймой. Длина знамени по верхней кромке - 2 1/4 аршина, по нижней кромке - 4 1/4 аршина. Ширина - 3 1/4 аршина. На знамени был вышит двуглавый чёрный орёл с московским щитком на груди. Легенда на знамени гласила: "Повелением Великого государя Царя и Великого князя Алексея Михайловича, всея Руси. Самодержца и многих государств государя и обладателя послано сие знамя на Дон. Донским атаманам и казакам, лета 7154 августа".

Игорь Чернозатонский